细胞培养基的配制

细胞培养基是细胞在体外生长繁殖的营养来源。配制培养基时需要注意以下几点：

1.基础培养基的选择： 根据细胞类型选择合适的基础培养基，如DMEM、RPMI-1640等。

2.添加物： 根据细胞的生长特性，添加血清、生长因子、激素、抗生素等。

3.配制步骤：1.计算所需试剂量。2.用去离子水溶解粉末培养基。3.调节pH值。4.过滤除菌。5.分装。

4.质量控制： 配制好的培养基应进行无菌检测，确保无污染。

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细胞传代

细胞传代是维持细胞生长的一种常规操作。

传代时机： 当细胞生长 confluency 达到80%~90%时，需要进行传代。

传代步骤： 去除旧培养基，用PBS洗涤细胞，加入胰酶消化细胞，加入新鲜培养基终止消化，将细胞悬液离心或直接分到新的培养瓶中，放入培养箱培养。

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细胞冻存与复苏

细胞冻存可以长期保存细胞，而复苏则是将冻存的细胞恢复到生长状态。

冻存：细胞密度达到80%~90%时进行冻存，配制冻存液（通常为细胞培养基+DMSO），将细胞悬液与冻存液混合均匀，将冻存管放入程序降温盒中，缓慢降温至-80℃，然后转入液氮长期保存。

复苏：从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中振荡，直至冰晶完全融化，将细胞悬液转移到离心管中，加入预温的培养基，离心，弃上清，加入新鲜培养基，将细胞接种到培养瓶中。

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常见细胞污染的预防与处理

细胞污染是细胞培养中常见的问题，主要包括细菌、真菌、支原体和病毒污染。

1.预防措施：无菌操作：严格遵守无菌操作规程。

2.定期消毒：定期对培养箱、超净台等设备进行消毒。

3.质量控制：对培养基、器皿等进行严格的质量控制。

4.定期检测：定期对细胞进行检测，及早发现污染。

处理方法：一旦发现污染，应立即丢弃污染的细胞和培养物。

1.对培养箱、超净台等设备进行彻底消毒。

2.对周围环境进行消毒。

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注意事项

1.环境控制： 细胞培养室应保持清洁、无尘、恒温恒湿。

2.操作规范： 严格遵守操作规程，避免交叉污染。

3.定期检查： 定期检查培养箱、CO₂培养箱等设备的运行状况。

4.记录实验数据： 详细记录实验过程和结果，以便分析和总结。

温馨提示：

1.细胞培养是一项精细的工作，需要耐心和细心。

2.不同的细胞类型对培养条件的要求不同，需要根据具体细胞类型进行调整。

3.如果遇到问题，可以参考相关文献或咨询专业人士。