比尔-朗伯定律（Lambert-Beer's Law），又称朗伯-比尔定律或比尔定律，是光吸收的基本定律，也是分光光度计定量分析的基础。该定律描述了物质对某一波长光吸收的强弱与吸光物质的浓度及其液层厚度间的关系，适用于所有的电磁辐射和所有的吸光物质，包括气体、固体、液体、分子、原子和离子。在分光光度计中的应用主要体现在以下几个方面：
一、定量分析的基础
比尔-朗伯定律的公式为：A = εcl，其中A是吸光度，ε是物质的摩尔吸光系数（与吸收物质的性质及入射光的波长有关），c是吸光物质的浓度（单位为mol/L），l是光程长度（单位为cm）。通过测量样品的吸光度A，并利用已知的摩尔吸光系数ε和光程长度l，可以计算出样品中物质的浓度c。这是分光光度计进行定量分析的基本原理。
二、构建校准曲线
为了准确进行定量分析，通常需要构建校准曲线。校准曲线是通过测量一系列已知浓度的标准溶液的吸光度，绘制浓度与吸光度的关系图。在测量未知浓度的样品时，可以通过比较其吸光度与校准曲线上的对应值，来确定样品中物质的浓度。
三、提高测量准确性
样品处理：为了提高定量分析的准确性和可靠性，需要对样品进行适当处理（如稀释、过滤等），以确保其在光度计的线性范围内。
仪器校准：定期校准仪器以消除仪器漂移和其他系统误差，也是保证测量准确性的重要措施。
四、适用条件与限制
入射光条件：比尔-朗伯定律要求入射光为单色平行光且垂直照射。然而，由于仪器分辨能力所限，实际入射光往往为很窄波段的谱带，这可能导致定律的偏离。因此，应尽量使入射光的光谱带宽尽可能小。
溶液浓度：定律只适用于浓度小于0.01mol/L的稀溶液。浓度过高时，吸光粒子间的相互作用增强，摩尔吸收系数发生改变，导致定律失效。
溶液性质：被测溶液应为均匀、非散射的体系。若溶液不均匀或存在散射现象（如胶体溶液、乳浊液或悬浮液），则会导致实际测量吸光度增大，偏离比尔-朗伯定律。
五、应用实例
比尔-朗伯定律在分光光度计中的应用非常广泛，几乎涵盖了所有需要定量或定性分析物质成分和含量的领域。例如，在生物化学中用于测定蛋白质、核酸等生物大分子的浓度；在药物分析中用于测定药物成分的含量；在环境监测中用于测定水体、大气中的污染物浓度等。
综上所述，比尔-朗伯定律在分光光度计中的应用是定量分析的基础和核心，通过准确测量样品的吸光度并结合已知参数进行计算，可以实现对样品中物质浓度的准确测定。同时，也需要注意定律的适用条件和限制以确保测量结果的准确性和可靠性。
